Die Behandlung mit entomopathogenen Pilzen verändert die Darmbakterienvielfalt von Rhipicephalus microplus-Zecken

Parasites & Vectors Band 16, Artikelnummer: 185 (2023) Diesen Artikel zitieren

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Zecken sind obligat blutsaugende Parasiten, die vor allem durch die Übertragung von Krankheitserregern für erhebliche wirtschaftliche Verluste und Bedenken hinsichtlich der Gesundheit von Mensch und Tier verantwortlich sind. Entomopathogene Pilze wurden intensiv als alternative Strategie zur Zeckenbekämpfung untersucht, die in Kombination mit synthetischen Akariziden bei der integrierten Zeckenbekämpfung eingesetzt werden kann. Hier untersuchten wir, wie die Darmbakteriengemeinschaft von Rhipicephalus microplus nach einer Behandlung mit Metarhizium anisopliae geformt wird und wie sich die Anfälligkeit der Zecken für den Pilz nach einer Störung der Darmbakterienmikrobiota auswirkt.

Teilweise vollgestopfte Zeckenweibchen wurden künstlich mit reinem Rinderblut oder Blut plus Tetracyclin ernährt. Zwei weitere Gruppen erhielten die gleiche Ernährung und wurden topisch mit M. anisopliae behandelt. Die Eingeweide wurden präpariert und die genomische DNA wurde 3 Tage nach der Behandlung extrahiert; Die variable Region V3–V4 des bakteriellen 16S-rRNA-Gens wurde amplifiziert.

Der Darm von Zecken, die kein Antibiotikum erhielten, aber mit M. anisopliae behandelt wurden, wies eine geringere Bakterienvielfalt und ein höheres Vorkommen von Coxiella-Arten auf. Der Simpson-Diversitätsindex und der Pielou-Gleichheitskoeffizient waren in der Darmbakteriengemeinschaft höher, wenn R. microplus mit Tetracyclin gefüttert und mit Pilzen behandelt wurde. Zecken aus mit Pilzen behandelten Gruppen (mit oder ohne Tetracyclin) zeigten eine geringere Überlebensrate als unbehandelte Weibchen. Eine frühere Fütterung der Zecken mit dem Antibiotikum veränderte ihre Anfälligkeit für den Pilz nicht. Ehrlichia spp. wurden in den gueated-Gruppen nicht nachgewiesen.

Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die myko-akarizide Wirkung nicht beeinträchtigt würde, wenn das Kalb, das diese Zecken beherbergt, eine Antibiotikatherapie erhält. Darüber hinaus wird die Hypothese, dass entomopathogene Pilze die Bakteriengemeinschaft im Darm von mit R. microplus überfüllten Weibchen beeinträchtigen können, durch die Tatsache gestützt, dass Zecken, die M. anisopliae ausgesetzt waren, eine dramatische Verringerung der Bakterienvielfalt aufwiesen. Dies ist der erste Bericht über einen entomopathogenen Pilz, der die Mikrobiota im Zeckendarm befällt.

Die Bedeutung des Mikrobioms von Zecken mit medizinischer und veterinärmedizinischer Bedeutung wurde in den letzten Jahren zunehmend erkannt [1,2,3]. Die meisten dieser Studien basieren auf der Bedeutung des Verständnisses von durch Zecken übertragenen Krankheiten, um ihre Bekämpfung zu verbessern. Als blutsaugende obligate Ektoparasiten sind Zecken zur Nahrungsergänzung auf Endosymbionten angewiesen [4,5,6]. Rhipicephalus microplus, die als die am weitesten verbreitete Zecke in tropischen Gebieten gilt [7], ist eine Einwirt-Zeckenart, die bevorzugt Rinder parasitiert und große wirtschaftliche Verluste bei Nutztieren verursacht, hauptsächlich aufgrund der Übertragung von Hämoparasiten wie Babesia bovis, Babesia bigemina und Anaplasma marginale [8, 9].

Antibiotikabehandlungen wurden entweder bei Wirbeltieren oder durch künstliche Fütterung oder Injektion direkt bei Zecken eingesetzt, um die Rolle des Darmmikrobioms in der Biologie von Zecken und durch Zecken übertragenen Krankheiten zu verstehen [10,11,12]. Es wurde gezeigt, dass die Zusammensetzung der Darmmikrobiota einer Zecke die Aufnahme, Besiedlung und Übertragung von durch Zecken übertragenen Krankheitserregern beeinflussen kann [13]. Als die Darmmikrobiota bei Ixodes scapularis verändert wurde, verringerte sich die Kolonisierung von Borrelia burgdorferi [11]. Dennoch wird auch das Gegenteil vermutet. Adegoke et al. [14] zeigten, dass bei einer Infektion von R. microplus mit einem Apicomplexan, Theileria sp., das Darmmikrobiom verändert wurde und seine Diversität, Artenvielfalt und Gleichmäßigkeit geringer waren als bei nicht infizierten Zecken.

Synthetische Akarizidanwendungen sind in der Regel die Methode der Wahl zur Zeckenbekämpfung, haben jedoch Bedenken hinsichtlich der Gesundheit von Mensch, Tier und Umwelt aufgeworfen und zur Entstehung resistenter Zeckenpopulationen geführt [15]. Der Einsatz entomopathogener Pilze ist eine vielversprechende Alternative bei der Suche nach einer sichereren und nachhaltigeren Methode zur Zeckenbekämpfung [16]. Die entomopathogene Pilzgattung Metarhizium umfasst mehrere Arten, die zu den am meisten erforschten und erfolgreichsten Biopestiziden in der Landwirtschaft gehören [17] und das Potenzial haben, kommerziell gegen Zecken eingesetzt zu werden. Pilzsporen infizieren Zecken bei Kontakt und können in der integrierten Schädlingsbekämpfung eingesetzt werden, um den übermäßigen Einsatz synthetischer Akarizide zu reduzieren, wie aus früheren Studien hervorgeht [16, 18, 19]. Dennoch bleibt noch viel zu untersuchen, um die Wechselwirkungen zwischen Zecken und Pilzen vollständig zu verstehen, insbesondere im Hinblick auf die Immun- und biochemischen Reaktionen pilzinfizierter Zecken [20,21,22,23,24,25]. Soweit uns bekannt ist, gibt es keinen Bericht über einen Zusammenhang zwischen Zeckendarmbakterien und der Wirkung von Pilz-Entomopathogenen. Könnte die Zeckenmikrobiota ihre Anfälligkeit für entomopathogene Pilze beeinflussen? Bei Insekten scheint die Antwort wirtsabhängig zu sein: Bei der Mücke Anopheles stephensi und dem Käfer Dendroctonus valens trug die Mikrobiota des Wirts positiv zur Pilzwirkung bei [26, 27], was für die deutsche Schabe Blattella germanica nicht nachgewiesen wurde [28]. .

Was beispielsweise über Wechselwirkungen zwischen Zecken-Mikrobiomen bekannt ist, hängt hauptsächlich mit ihrer Physiologie und den Auswirkungen auf die Biologie von durch Zecken übertragenen Krankheiten zusammen. Die Erstbeschreibung der Bakterienvielfalt von R. microplus erfolgte 2011 durch Andreotti et al. [29] und in jüngerer Zeit beschreiben Autoren mehr Ergebnisse nach verschiedenen geografischen Standorten [30]. In der vorliegenden Studie wollten wir untersuchen, wie die ersten Schritte der entomopathogenen Pilzinfektion nach topischer Behandlung Veränderungen der Darmbakteriengemeinschaft bei R. microplus auslösen können und ob eine Störung der Darmbakteriengemeinschaft die Anfälligkeit dieser Zecke für entomopathogene Pilze beeinflusst.

Ein Kalb wurde künstlich mit R. microplus-Larven (Stamm Porto Alegre) infiziert (Reck et al. [15]) und in der WO Neitz Parasitological Research Station an der Federal Rural University of Rio de Janeiro (UFRRJ), Brasilien (CEUA [Ethics Ausschuss für die Verwendung von Tieren]/Veterinärinstitut, UFRRJ – Protokoll Nr. 9714220419). Zecken wurden 19 oder 20 Tage lang auf natürliche Weise mit dem Kalb gefüttert und dann manuell entfernt, wobei sie vorsichtig von der Haut des Wirts gelöst wurden (um eine Beschädigung der Mundwerkzeuge zu vermeiden). ). Das verwendete Kalb wurde vor dem Experiment zwei Monate lang nicht mit Antibiotika oder Akariziden behandelt. Die künstliche Fütterung von R. microplus wurde von Valim et al. [31] und Ribeiro et al. [32] adaptiert. Teilweise vollgestopfte Zeckenweibchen wurden gewogen , 3 Minuten lang mit Natriumhypochlorit (0,05 % v/v) oberflächensterilisiert und mit Papiertüchern getrocknet. Das zur künstlichen Ernährung der Zecken verwendete Blut wurde direkt aus der Halsschlagader desselben Kalbes entnommen (CEUA/Veterinary Institute, UFRRJ – Protokoll). Nr. 6407270619), bei dem Zecken auf natürliche Weise durch ein Vakuumsystem in ein 3,6-ml-Röhrchen mit Citrat als Antikoagulans (Vacuplast, Türkei) eingespeist wurden. Zeckenweibchen mit einem Gewicht von etwa 30–70 mg wurden bei 37 ± 1 °C und ≥ 80 % relativer Luftfeuchtigkeit 7 Stunden lang künstlich mit reinem Blut oder Blut plus Tetracyclinhydrochlorid (Merck, Darmstadt, DE) in einer Konzentration von 0,05 mg ml−1 unter Verwendung von Kunststoffspitzen gefüttert (rechts). Die Spitzen wurden stündlich einzeln mit Blut (bis zu 50 µl) so viel wie nötig gefüllt. Teilverstopfte Weibchen durften durchschnittlich höchstens 350 µl Blut aufnehmen. Um die Blutaufnahme zu messen, wurden die Zecken vor und nach der künstlichen Fütterung einzeln gewogen. Für die weitere Analyse wurden nur Zecken berücksichtigt, die ihr Ausgangsgewicht verdoppelt hatten (0,03 µg Tetracyclin mg-1 weibliches Gewicht) [12].

In der vorliegenden Studie wurde das Pilzisolat Metarhizium anisopliae sensu stricto LCM S04 [19] verwendet. Die Kulturen wurden 21 Tage lang unter kontrollierten Bedingungen (25 ± 1 °C; ≥ 80 % relative Luftfeuchtigkeit) auf Hafermedium kultiviert. Konidien wurden in einer Lösung aus sterilem destilliertem Wasser mit Polyoxyethylensorbitanmonooleat (Tween® 80) (Isofar, Rio de Janeiro, Brasilien) 0,01 % (v/v) bei 1 × 108 Konidien ml-1 suspendiert. Die Lebensfähigkeit des Pilzes wurde durch Ausplattieren eines Aliquots von 20 µl von 1 × 105 Konidien ml−1 derselben Pilzsuspension auf Kartoffel-Dextrose-Agar (PDA) (Kasvi, Paraná, Brasilien) beurteilt. Die Keimung der Konidien wurde 24 Stunden nach der Inkubation bei 25 ± 1 ° C und einer relativen Luftfeuchtigkeit ≥ 80 % unter Verwendung eines optischen Mikroskops (× 400) (ECLIPSE E200; Nikon, Tokio, Japan) bestimmt. Es wurden mindestens 300 Konidien ausgewertet und die prozentuale Keimung berechnet. Konidien galten als gekeimt, wenn der Keimschlauch sichtbar war. Die in den Experimenten verwendeten Pilzsuspensionen hatten eine Lebensfähigkeit von mindestens 95 %. Da die vorliegende Studie Zugriff auf das genetische Erbe Brasiliens hatte, wurde die Forschung beim Nationalen System für die Verwaltung des genetischen Erbes und des damit verbundenen traditionellen Wissens (SisGen) unter dem Code AA47CB6 registriert.

Zecken, die künstlich mit reinem Blut oder Blut plus Tetracyclin gefüttert wurden (Abschnitt „Künstliche Fütterung von Rhipicephalus microplus-Weibchen“), wurden topisch mit M. anisopliae-Suspension behandelt. Vier Gruppen zu je 10 Weibchen wurden wie folgt gebildet: unbehandelte Zecken, gefüttert mit reinem Blut (Kontrollgruppe) (ctrl); unbehandelte Zecken, gefüttert mit Blut plus Tetracyclin (T); mit Pilzen behandelte Zecken, die zuvor mit reinem Blut gefüttert wurden (F); Mit Pilzen behandelte Zecken, die zuvor mit Blut plus Tetracyclin (T+F) gefüttert wurden. Sobald die künstliche Fütterung beendet war, wurden die Zecken in Leitungswasser gewaschen, um Blutreste zu entfernen, getrocknet und gewogen. Dann wurden Zecken, deren Gewicht sich verdoppelt hatte, mit doppelseitigem Klebeband in Petrischalen fixiert und topisch mit 20 µl von 1 × 108 Konidien ml−1 behandelt. Die Suspension wurde auf den Rückenbereich der Zecke aufgetragen und die Zecken wurden bei 25 ± 1 °C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von ≥ 80 % gehalten. 72 Stunden nach der Pilzbehandlung wurden die Eingeweide von drei Weibchen jeder Gruppe zur DNA-Extraktion präpariert. Das Überleben der anderen Zecken wurde 15 Tage lang täglich aufgezeichnet. Dieser Bioassay wurde dreimal mit neuen Chargen von Konidien und R. microplus-Zecken durchgeführt.

Die Eingeweide von R. microplus-Weibchen wurden mit sterilen Pinzetten und Skalpellklingen unter Verwendung steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) [130 mM NaCl, 1 mM KH2PO4, 5,6 mM Na2HPO4, 2 mM KCl (pH 7,2)] präpariert. Entnommenes Darmgewebe wurde zweimal in sterilem PBS gewaschen und später bis zur Extraktion in RNA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) bei –80 ° C aufbewahrt. Zunächst wurden Zeckendärme in flüssigem Stickstoff eingefroren und mit einem sterilen Stößel mazeriert. Die DNA des Darmhomogenats wurde gemäß dem Protokoll des DNeasy Blood & Tissue Kits gemäß den Anweisungen des Herstellers (QIAGEN Inc., Valencia, CA, USA) extrahiert. Die DNA des Blutes des Kalbes (B), das für die natürliche und künstliche Fütterung verwendet wurde, wurde ebenfalls nach demselben oben genannten Protokoll extrahiert.

Die variable Region V3–V4 des bakteriellen 16S-rRNA-Gens wurde für genomische DNA aus 13 Proben (Dreifachproben aus Darmproben jeder Gruppe und eine für die Blutkontrolle [B]) unter Verwendung der Primer Bakt_341F (CCTACGGGNGGCWGCAG) und Bakt_805R (GACTACHVGGGTATCTAATCC) amplifiziert. [33]. Die Herculase II Fusion DNA-Polymerase (Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, USA) und das Nextera XT Index Kit v2 (Illumina, Inc., San Diego, CA, USA) (300 Basenpaare [bp] gepaart -End-Reads) wurden auf der Illumina® MiSeq®-Plattform mit einem 30 %igen PhiX-Spitze auf Macrogen (Seoul, Südkorea) verwendet. Die binären Basisaufrufe wurden in das FASTQ-Format konvertiert, Sequenzen wurden demultiplext und Barcodes wurden mit dem Paket bcl2fastq v2.20 (Illumina Inc., San Diego, CA, USA) entfernt.

Aus den Rohdaten (1.250.293 Vorwärts- und Rückwärtssequenzen) wurden Adapter entfernt, die dann anhand von Qualitätswerten gefiltert und mithilfe der DADA2 Pipeline Version 1.16 [34] in R Version 4.1.1 (R Core Team 2022) in Verbindung mit RStudio beschnitten wurden 1.4.1717 (RStudio Team 2022) [35]. Zur Berechnung der optimierten Trunkierungsparameter wurde das FIGARO-Tool [36] verwendet. Vorwärts- und Rückwärtsablesungen wurden auf 270 bp bzw. 215 bp gekürzt. Vorwärts- und Rückwärtslesevorgänge mit mehr als zwei erwarteten Fehlern wurden verworfen, und Lesevorgänge wurden beim ersten Auftreten eines Qualitätsfaktors ≤ 2 abgeschnitten. Die Lesefehlerraten wurden durch die Funktion „learnErrors“ gelernt, wobei zwischen Fehlerratenschätzung und Stichprobe gewechselt wurde Inferenz bis zur Konvergenz. Die Amplikonsequenzvarianten (ASVs) wurden mit der Funktion „given“ abgeleitet und Sequenzen wurden mit der Funktion „mergePairs“ zusammengeführt. Die Chimären wurden mithilfe der Funktion „removeBimeraDenovo“ mithilfe der Methode des probenübergreifenden Konsenses aus Sammlungen eindeutiger Sequenzen entfernt. T taxonomische Zuweisungen wurden basierend auf der SILVA SSU 132-modifizierten Datenbank [37] unter Verwendung der „IdTaxa“-Funktion aus dem DECIPHER v 2.20 R-Paket [38] angegeben, einer Methode mit einer Klassifizierungsleistung, die besser ist als die standardmäßige naive Bayes'sche Klassifikatormethode [ 39]. Sequenzen, die dem mitochondrialen Genom, Chloroplasten und Nichtbakterien zugeordnet sind, wurden entfernt. Nach diesen Verfahren wurden 3313 ASVs den verbleibenden 839.263 Bakteriensequenzen für das Verdünnungsverfahren und die statistische Analyse zugeordnet.

Die Zeckenüberlebenskurve wurde durch einen Log-Rank-Test mit einem Signifikanzniveau von 0,05 unter Verwendung von GraphPad Prism Version 8.4.2 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) analysiert. Alle anderen statistischen Analysen wurden in der R-Softwareversion 4.1.1 (R Development Core Team, Wien, Österreich) in Verbindung mit RStudio 1.4.1717 (Posit Software, Boston, MA) durchgeführt.

Multivariate explorative Analysen wurden mit dem „veganen“ R-Paket Version 2.5-7 durchgeführt [40]. Die Beta-Diversität wurde auf der Grundlage einer Hauptkoordinatenanalyse (PCoA) unter Verwendung der gewichteten UniFrac-Distanzmatrix der mikrobiellen Gemeinschaften in jeder Probe untersucht und zeigte Unterschiede zwischen Bakteriengemeinschaften aus verschiedenen Behandlungen. Das Vorherrschen seltener, spezialisierter und generalistischer ASVs wurde mit der multinomialen Artenklassifizierungsmethode (CLAM) mit Anpassung für mehrere Vergleiche unter Verwendung des Supermajoritätsspezialisierungsschwellenwerts (K = 2/3, P = 0,05) bewertet (41). Die Diagramme wurden mit dem ggplot2 R-Paket Version 3.3.3 [42] erstellt.

Die Analyse des Netzwerks zwischen ASVs wurde mithilfe von Bootstrap-Schätzungen der SparCC-Korrelation durch das SpiecEasi R-Paket Version 1.1.0 ausgewertet, was zu Knoten- und Kantenmatrizen führte [43]. Für die grafische Konstruktion mit der Gephi-Softwareversion 0.9.2 [44] wurden nur Kanten mit signifikanten Korrelationen (P < 0,01) ausgewählt, wobei die Anzahl der Verbindungen (Grad), die Zwischenzentralität (BC) und das Vorzeichen der Korrelationen hervorgehoben wurden.

Die Überlebensrate der Zecken in der Strg-Gruppe war höher als in den Gruppen F (χ2 = 81,9, P < 0,0001) und T+F (χ2 = 68,4, P < 0,0001), unterschied sich jedoch nicht von der T-Gruppe (χ2 = 0,06, P = 0,80). Das F- und T+F-Überleben war ähnlich (χ2 = 0,5, P = 0,47) (Abb. 1). Zecken aus beiden mit Pilzen behandelten Gruppen (mit und ohne Tetracyclin) waren innerhalb von 12 Tagen tot (0 % Überleben). Gleichzeitig zeigten die pilzunbehandelten Gruppen (ctrl und T) eine durchschnittliche Überlebensrate von 85 %. Es wurde kein Unterschied im Überleben zwischen Zecken beobachtet, die künstlich mit Tetracyclin (T) gefüttert wurden oder nicht (ctrl).

Überleben von Rhipicephalus microplus-Weibchen nach künstlicher Bluternährung mit oder ohne Behandlung mit Tetracyclin und Metarhizium anisopliae (Durchschnitt und Standardfehler). Das Sternchen zeigt einen statistischen Unterschied zwischen Strg und T+F (P < 0,05) im Langzeit-Rank-Test an. Behandlungen: ctrl – mit Pilzen unbehandelte Zecken, die zuvor mit reinem Blut gefüttert wurden (Kontrollgruppe); T – mit Pilzen unbehandelte Zecken, die zuvor mit Blut plus Tetracyclin gefüttert wurden; F – mit Pilzen behandelte Zecken, die zuvor mit reinem Blut gefüttert wurden; T+F – mit Pilzen behandelte Zecken, die zuvor mit Blut plus Tetracyclin gefüttert wurden

PCoA, basierend auf der gewichteten UniFrac-Distanzmatrix, erklärte etwa 77 % der Gesamtvarianz des multivariaten Modells nur über die beiden Hauptachsen (Abb. 2A). Durch diesen Parameter unterschied sich die Darmbakteriengemeinschaft von mit Tetracyclin gefütterten und mit M. anisopliae (T+F) behandelten Zecken von den anderen Nischen. Der Darm von Zecken, die mit Blut plus Tetracyclin ohne Pilzbehandlung gefüttert wurden (T) oder mit reinem Blut gefüttert und mit Pilzen behandelt wurden (F), wies relativ nahe beieinander liegende Bakteriengemeinschaftsstrukturen auf. Die Gemeinschaften der ersteren Gruppe (d. h. T) ähnelten auch denen, die im Darm von Zecken der CTRL-Gruppe (mit reinem Blut gefütterte Zecken) beobachtet wurden. Die Bakteriengemeinschaft im Blut des Kalbes (B) war am deutlichsten.

Struktur und Alpha-Diversität von Bakteriengemeinschaften in Eingeweiden und Kälberblut von Rhipicephalus microplus. Eine PCoA-basierte Community-Beta-Diversitätsanalyse, basierend auf der distanzgewichteten UniFrac-Matrix für ASVs, die die Unterschiede zwischen den Gruppen zeigt. B Anzahl der eindeutigen ASVs. C Shannons Diversitätsindex. D Simpsons Diversitätsindex. E Pielou-Gleichheitskoeffizient. Die Punkte geben die genaue Position des Mittels an. B–E-Behandlungen mit Mittelwerten, denen die gleichen hochgestellten Kleinbuchstaben folgen, unterscheiden sich durch den Tukey Honestly Significant Difference (HSD)-Test bei einem Signifikanzniveau von 5 % nicht voneinander. Die Gruppenbezeichnungen sind in Abb. 1 angegeben

Die Behandlungen zeigten in den Analysen der Beta-Diversität eine ähnliche durchschnittliche Anzahl bakterieller ASVs (Abb. 2B). In Übereinstimmung mit dem PCoA-Ergebnis waren der Shannon-Diversitätsindex (Abb. 2C), die Simpson-Diversität (Abb. 2D) und der Pielou-Gleichheitskoeffizient (Abb. 2E) [45, 46], die im Darm von T+F gemessen wurden, am höchsten und unterschieden sich signifikant von denen, die bei den anderen Behandlungen beobachtet wurden, mit Ausnahme des Shannon-Index, bei dem sich T nicht von T+F unterschied. Insgesamt wies F die niedrigsten Indizes der Darmbakterienvielfalt auf, gefolgt von B, Strg, T, bis es bei T+F seinen Höhepunkt erreichte.

Die taxonomische Profilierung generierte 839.263 qualitätsgefilterte Bakteriensequenzen, die in 3313 ASVs klassifiziert wurden. Die ASV-Klassifikationsabdeckung in den taxonomischen Rängen war wie folgt: Stamm (96 %), Klasse (94 %), Ordnung (86 %), Familie (75 %), Gattung (49 %) und Art (5 %). Die 19 am häufigsten vorkommenden Familien machten mehr als 80 % der Gesamtzahl der Familien aus (Abb. 3A). In allen Behandlungen waren die am häufigsten vorkommenden Familien (mehr als 2 % aller ASVs) Coxiellaceae (43,9 % der Sequenzen), gefolgt von Anaplasmataceae (8,1 %), Lachnospiraceae (4,9 %), Ruminococcaceae (3,3 %), Comamonadaceae (3,0 %). ) und Bacteroidaceae (2,6 %).

Zusammensetzung der vorherrschenden A-Bakterienfamilien und B-Gattungen im Zeckendarm und reinem Blut (B). Die Proben wurden entsprechend der mit dem Spearman-Korrelationskoeffizienten berechneten Entfernung als Dendrogramme gruppiert. Die Gruppenbezeichnungen sind in Abb. 1 angegeben

Nach den Familien machten die 19 am häufigsten vorkommenden Gattungen mehr als 80 % der gesamten Gattungen aus (Abb. 3B). Die am häufigsten vorkommenden Gattungen (mehr als 1 % aller ASVs) waren Coxiella (43,9 %), Anaplasma (6,3 %), Bacteroides (2,6 %), Streptococcus (1,9 %), Ehrlichia (1,8 %), Caviibacter (1,7 %). Eubacterium (1,5 %), Lactobacillus (1,1 %) und Pseudomonas (1,1 %). Mit Ausnahme der ASVs, die Anaplasma und Ehrlichia zugeordnet sind, beide aus der Familie der Anaplasmataceae, waren alle diese Gattungen Vertreter verschiedener Familien.

Gemäß dem Korrelationskoeffizienten von Spearman, der die PCoA-Ergebnisse unterstützt (Abb. 2A), unterschieden sich die Zusammensetzungen der Bakterienfamilien (Abb. 3A) und Gattungen (Abb. 3B) in B und im Darm der Zecken von T+F von denen, die in beobachtet wurden andere Behandlungen, insbesondere Strg. Während in den anderen Behandlungen (d. h. Strg, T und F) Bakterien von Coxiellaceae, meist Coxiella, vorherrschend waren, wiesen T+F-Eingeweide eine Vorherrschaft von Arten aus Lachnospiraceae auf, gefolgt von Arten von Comamonadaceae und Ruminococcaceae. Darüber hinaus zeigten Daten aus den Eingeweiden der T+F-Behandlung eine Häufung mehrerer anderer Bakterienfamilien mit einer Häufigkeit von weniger als 0,5 %. In B dominierten Anaplasmataceae (hauptsächlich in der Gattung Anaplasma), gefolgt von Bartonellaceae (hauptsächlich Bartonella zugeordnet).

Gemäß der multinomialen Artenklassifizierungsmethode (CLAM) wurde eine Anreicherung bis zur Bakterienklassenebene beobachtet (Zusatzdatei 1: Abb. S1). Generell waren bei allen Behandlungen Bakterien aus der Klasse der Gammaproteobakterien vorherrschend. Laut CLAM deuteten Kontraste mit der Strg-Anreicherung auf eine Anreicherung von Bacilli und Clostridia in F (Zusatzdatei 1: Abb. S1A), Clostridia- und Actinobacteria-Klassen in T+F (Zusatzdatei 1: Abb. S1B) und Alphaproteobacteria und Bacilli in hin B (Zusatzdatei 1: Abb. S1C). Es wurde auch eine Anreicherung bis zur generischen Ebene beobachtet, wobei die Nischenbelegung jeder Behandlung mit der Strg verglichen wurde (Abb. 4). Je nach Vergleich variierten die angereicherten Gruppen (spezialisierte Bakterien) in der Kontrollgruppe, wobei Faecalibacterium, Anaplasma und Streptococcus vorherrschten (Abb. 4).

Multinomiale Artenklassifizierungsmethode (CLAM) für den Nischenbelegungstest. Bakteriengattungen werden nur in Kreisen dargestellt, die in jedem Lebensraum deutlich hervorstechen. Die Generalisten (grau), Spezialisten (orange, blau, grün, rosa und lila) und seltene (schwarz) werden mit ihren jeweiligen Prozentsätzen angezeigt. Prozentwerte stellen die direkte Anzahl einzigartiger ASVs in jeder Nische dar. AT vs. Strg; BF vs. Strg; C T+F vs. Strg; D-Blut vs. Strg. Die Gruppenbezeichnungen sind in Abb. 1 angegeben

Die Eingeweide der Gruppe T zeigten eine signifikante Anreicherung spezialisierter Bakterien (51,4 %), wobei ASVs hervorgehoben wurden, die mit Staphylococcus, Corynebacterium, Anaplasma und anderen Arten von Lachnospiraceae assoziiert sind (Abb. 4A). Im Darm von mit Pilzen behandelten Weibchen (F) machten die Spezialbakterien 43 % der gesamten ASVs aus, wobei Cutibacterium, Streptococcus, Staphylococcus, Ruminococcus, Faecalibacterium und andere ASVs aus den Familien Lachnospiraceae und Ruminococcaceae hervorstechen (Abb. 4B). ). Die Eingeweide von T+F wiesen spezialisierte Bakterienarten auf, die auf nur 27,6 % beschränkt waren, was die Anreicherung der Gattungen Enterococcus, Streptococcus, Corynebacterium, Anaerostipes, Phascolarctobacterium, Eggerthella und anderer mit den Familien Lachnospiraceae, Xanthobacteraceae und Moraxellaceae assoziierter Gattungen unterstreicht (Abb. 4C). Außerdem wurden die Bakteriengemeinschaften von Kälberblut (B) und den Eingeweiden von Zecken, die sich ausschließlich von Blut ernährten (ctrl), verglichen, was auf eine Dominanz von Spezialisten mit Raten von 29,9 % bzw. 58,1 % hinwies (Abb. 4D). In diesem Fall wurde im Blut eine signifikante Anreicherung von ASVs der Gattungen Cutibacterium, Faecalibacterium und Corynebacterium im Vergleich zum CT beobachtet.

Die Analyse des gleichzeitigen Vorkommens von ASVs ergab Schlüsselarten (Keystone-Arten), die in den verschiedenen untersuchten Proben Bakteriengemeinschaften aufrechterhielten (Abb. 5, Tabelle 1). Die Darmbakteriengemeinschaften unbehandelter Zecken (ctrl) wurden hauptsächlich durch zwei Schlüsselarten aus den Gattungen Ehrlichia und Coxiella verbunden. Vier ASVs der Gattungen Cutibacterium, Faecalibacterium, Caviibacter und Bacteroides spielten ebenfalls eine Rolle (Abb. 5A). Dieses Netzwerk hatte 83 Knoten, 1446 Kanten und 68,19 % positive Interaktionen (Tabelle 1).

Netzwerk-Koexistenzanalyse der Bakteriengemeinschaften in Rhipicephalus microplus-Därmen, die mit Metarhizium anisopliae behandelt wurden oder nicht, basierend auf dem 16S-rRNA-Gen. Die Größe der Knoten ist proportional zum Grad und die Farben zeigen diskrete Intervalle der Betweenness Centrality (BC) an. Die Gruppenbezeichnungen sind in Abb. 1 angegeben

Die Bakteriengemeinschaft aus T hatte die höchste Netzwerkkomplexität (Knoten = 106, Kanten = 3251, positive Korrelationen = 54,57 %). Keystone-Arten waren mit einem ASV von Caviibacter assoziiert, gefolgt von Coxiella und in geringerem Maße mit Cloacibacterium, Bacteroides und anderen Arten aus den Familien Lachnospiraceae und Peptostreptococaceae (Abb. 5B, Tabelle 1).

Das Netzwerk aus F zeigte die zweithöchste Komplexität (Knoten = 97, Kanten = 2185, positive Korrelationen = 67,19 %), wobei zwei ASVs der Gattung Coxiella als Schlüsselarten hervorgehoben wurden, gefolgt von Staphylococcus, Streptococcus und Actinomyces (Abb. 5C, Tabelle 1). Bei Zecken, die mit Tetracyclin gefüttert und mit Pilzen (T+F) behandelt wurden, waren die Netzwerkkomplexität und die Anzahl positiver Korrelationen geringer (Knoten = 74, Kanten = 1247, positive Korrelationen = 44,03 %) im Vergleich zu denen, die bei der Einzelzecken beobachtet wurden Behandlungen (Strg, T oder F) (Abb. 5D). Im Fall von Zecken, die mit Tetracyclin gefüttert und mit Pilzen (T+F) behandelt wurden, wiesen mehrere ASVs ähnliche Zentralitäten und Grade der Verbindung auf. Dies unterstreicht die Beteiligung vieler Gattungen, darunter Lactobacillus, Eubacterium, Colidextribacter, Prevotella, Trueperella, Campylobacter und Phascolarctobacterium.

Wie erwartet war das bakterielle Gemeinschaftsnetzwerk des Kälberbluts (B) am wenigsten komplex (Knoten = 38, Kanten = 140, positive Korrelationen = 48,57 %). Dieses Netzwerk wurde durch mehrere ASVs reguliert, hauptsächlich solche, die mit Streptococcus, Pseudomonas, Escherichia/Shigella, Bacteroides, Bartonella, Lactobacillus, Anaplasma und Mycoplasma assoziiert sind, sowie durch ein ASV, das mit der Familie Lachnospiraceae assoziiert ist (Abb. 5E).

Antibiotika spielen eine entscheidende Rolle bei der Behandlung von Infektionskrankheiten wie klinischer Mastitis [47] und durch Zecken übertragenen Krankheiten [48] und können als Wachstumsförderer eingesetzt werden [49]. Dennoch ist der Einfluss der Antibiotikagabe auf die Anfälligkeit von Zecken für eine Pilzbehandlung noch ungeklärt. In der vorliegenden Studie wurden Zecken künstlich mit Tetracyclin gefüttert und topisch mit einem entomopathogenen Pilz behandelt. Interessanterweise wurde bei den mit dem Pilz behandelten Weibchen eine ähnliche Überlebensrate beobachtet, unabhängig davon, ob sie zuvor mit dem Antibiotikum gefüttert wurden oder nicht. Gemäß dem Veterinärhandbuch von Merck Sharp & Dohme Corp. (MSD) beträgt die Behandlung mit Oxytetracyclin für Rinder 10 mg−1 kg−1 Tag−1. Hier folgte die Tetracyclinkonzentration, die dem Rinderblut für die künstliche Zeckenfütterung zugesetzt wurde, dem Verhältnis von 30 mg−1 kg−1 Tag−1, basierend auf einer früheren Studie [12]. Dementsprechend wurde die Anfälligkeit der Zecken gegenüber M. anisopliae nicht beeinträchtigt, selbst wenn man ihnen erlaubte, sich von einer Blutmahlzeit mit einer höheren Antibiotikakonzentration zu ernähren. Dies lässt darauf schließen, dass die Anfälligkeit weiblicher Zecken nicht beeinträchtigt wird, wenn Rinder eine Antibiotikatherapie mit Tetracyclin erhalten.

Bakteriengemeinschaften in Zecken, die mit Antibiotika und Pilzen (T+F) behandelt wurden, wiesen den höchsten Anteil an Sequenzen auf, die zu selten für eine Klassifizierung waren, dh die Anzahl der Sequenzen, die diese Bakterienarten repräsentierten, reichte nicht aus, um in der Analyse berücksichtigt zu werden. Daher ist es möglich, dass diese Behandlungen zusammen die Anreicherung einer breiten Palette von Bakterienarten ermöglichten. Darüber hinaus zeigte die Nischenbelegungsanalyse für alle behandelten Gruppen im Vergleich zur CTRL eine höhere Anzahl spezialisierter Arten als Generalisten, was darauf hindeutet, dass alle Behandlungen die Bakteriengemeinschaft auf unterschiedlichen Ebenen stören könnten. Die Analyse der relativen Beteiligung der Bakterienklasse (CLAM) (Abb. 4) ergab, dass die Bakterientaxa in F auch in T+F beobachtet wurden; Allerdings waren die Sequenzwerte der fünf am häufigsten vorkommenden Taxa in F höher als in T+F. Diese Fakten erklären somit die unterschiedlichen Diversitätsindizes zwischen diesen Gruppen. Darüber hinaus gab es in T+F einen Anstieg der Anzahl der Taxa, die ihre Bakterienzusammensetzung im Vergleich zu F veränderten. Diskrepanzen zwischen F und T+F in der Netzwerk-Koexistenzanalyse (Abb. 5) zeigen, wie die Wechselwirkungen zwischen Bakterien und Die wichtigsten Arten in jeder Gruppe variierten. Die T+F-Gruppe wies den höchsten Diversitätsindex auf (Abb. 3), im Gegensatz zu der geringsten Anzahl an Schlüsselarten und bakteriellen Interaktionen. Keystone-Arten kommen nicht unbedingt häufig vor, haben aber aufgrund der Anzahl der Wechselwirkungen einen starken Einfluss auf andere Arten [50, 51]. Dementsprechend können Schlüsselarten aufgrund ihrer starken Verbindungen die Zusammensetzung der Bakteriengemeinschaft beeinflussen. Obwohl die T+F-Daten eine höhere Anzahl an Arten aufwiesen (d. h. einen erhöhten Diversitätsindex), konnten bei diesen Arten keine soliden Wechselwirkungen festgestellt werden, wahrscheinlich weil es sich um opportunistische Bakterien handelt, die nur aufgrund von Störungen entstanden sind, die durch die Pilz- und Antibiotikabehandlung zusammen verursacht wurden.

Endosymbiotische Mikroorganismen spielen bei obligat hämatophagen Arthropoden eine wichtige Rolle und liefern Nährstoffe, die in der Blutnahrung knapp sind [4, 52]. Duron et al. [5] berichteten, dass Ornithodoros moubata auf den Endosymbionten Francisella angewiesen ist, der für die Vitamin-B-Synthese verantwortlich ist. Guizzo et al. [12] zeigten, dass Coxiella für R. microplus ein Endosymbiont ist, der für die Metanymphenreifung und die Zeckenphysiologie von entscheidender Bedeutung ist. Diese Autoren zeigten auch, dass Coxiella in verschiedenen Geweben von R. microplus-Weibchen reichlich vorhanden war, wobei die Konzentration im Eierstock und den Malpighian-Tubuli vorherrschte, die Konzentration im Darm jedoch sehr gering war. Andererseits war Coxiella in unserer Studie in allen Gruppen außer T+F die am häufigsten vorkommende Bakteriengattung im Darm von R. microplus. Die höhere Häufigkeit dieses Taxons in F deutet darauf hin, dass die Pilzinfektion eine Anreicherung von Coxiella im Zeckendarm ermöglicht, wodurch andere Taxa verringert und die Bakterienvielfalt verringert werden. Dieses Ergebnis wurde auch bei Anopheles stephensi nach Behandlung mit Beauveria bassiana beobachtet [27]. Diese Autoren berichteten, dass sich der Symbiont Serratia marcescens nach der Pilzbehandlung im Mückendarm vermehrte. Im Gegensatz dazu wiesen die Därme von T+F hier die geringste Coxiella-Häufigkeit und die höchste Diversität auf. In dieser Gruppe resultierte das verringerte Vorkommen von Coxiella wahrscheinlich aus der Kombination aus der Verabreichung von Tetracyclin (einem Breitbandwirkstoff, der die bakterielle Proteinsynthese hemmt) [53] und der Pilzbehandlung. Die Reduzierung von Coxiella scheint das Vorkommen anderer Bakterien im Darm zu ermöglichen, was die erhöhte Diversität erklären könnte. Darüber hinaus wurde vermutet, dass einige Bakterien in der Bakteriengemeinschaft im Zeckendarm resistent gegen Tetracyclin sind [54]. Diese Tatsache könnte erklären, warum die Coxiella-Häufigkeit bei mit Tetracyclin gefütterten Zecken (T) im Vergleich zu ctrl nicht verringert war, da in Coxiella burnetii mit Resistenz assoziiertes Protein gefunden wurde (55).

Soweit wir wissen, ist dies der erste Bericht über Wechselwirkungen zwischen Zecken und Darmbakterien mit einem entomopathogenen Pilz. Frühere Studien [26, 56] mit verschiedenen Insektenarten berichteten, dass Veränderungen in der Darmmikrobiota je nach Arthropodenwirt die entomopathogene Pilzwirkung verbessern oder beeinträchtigen können. Dieses Ergebnis könnte auf Unterschiede in der Mikrobiota-Zusammensetzung verschiedener Wirte zurückzuführen sein. Hier war das Zeckenüberleben der mit dem Pilz behandelten Weibchen, die das Antibiotikum (F oder T+F) erhielten oder nicht erhielten, ähnlich. Analoge Ergebnisse wurden von Ramirez et al. beobachtet. (2018) [57] mit Aedes aegypti. Laut diesen Autoren veränderte die verringerte Darmbakterienlast die entomopathogene Pilzvirulenz nicht, selbst bei Verwendung einer hohen Pilzinokulumlast. Es ist möglich, dass diese abgetöteten Bakterien (Bakterien, die nach der Antibiotikabehandlung entfernt wurden) keinen Einfluss auf den Erfolg oder Misserfolg der Pilzinfektion hatten. Diese Studie konzentrierte sich jedoch darauf, nur erwachsene Weibchen von R. microplus zu testen, und daher könnten die Auswirkungen einer Störung der Bakteriengemeinschaft in unreifen Phasen zu einem anderen Ergebnis führen.

Die vorliegende Studie analysierte die Eingeweide von Zecken 3 Tage nach der Behandlung mit M. anisopliae. Dieser Zeitpunkt wurde auf der Grundlage bisher unveröffentlichter Arbeiten ausgewählt [Mesquita, E.; Golo, PS], was zeigt, dass LCM S04-Konidien nach 72 Stunden bereits gekeimt und in die Kutikula von R. microplus eingedrungen sind und die inneren Organe der Zecke erreicht haben. Darüber hinaus führen Pilze im Laufe der Zeit zu einer Verschlechterung des Arthropodenkörpers, was die Präparationsmethoden erschwert. Dementsprechend muss noch geklärt werden, was nach 72 Stunden in Bezug auf die Wechselwirkungen zwischen Bakterien und Pilzen passiert sein könnte. Coxiella, Ehrlichia, Caviibacter, Cutibacterium und Escherichia/Shigella waren die am häufigsten im Darm der CTRL-Gruppe beobachteten Gattungen. Die Blutprobe und die Strg-Gruppe teilten nur 0,9 % der Sequenzen, gefolgt von Strg und T+F, mit 0,1 % der Generalisten. Im Darm identifizierte Bakterien können hauptsächlich durch transovarielle Übertragung, über Generationen hinweg und über die Haut des Wirts vererbt werden [4]. Obwohl das hier verwendete Kalb keine klinischen Anzeichen einer Anaplasmose zeigte, zeigte die molekulare Analyse der Blutprobe, dass Anaplasma die am häufigsten vorkommende Bakteriengattung im Blut dieses Tieres war (Abb. 3). Diese Tatsache weist jedoch nur darauf hin, dass die Häufigkeit von Anaplasma im Blut höher war als die der anderen Bakterien und nicht unbedingt auf ein hohes Infektionsniveau. Dieser Verlust von Taxa zwischen dem Blut des Wirts und der Zecke kann durch den Blutverdauungsprozess erfolgen, da der Zeckendarm über Abwehrstrategien gegen invasive Mikroorganismen verfügt. Diese Abwehr wird hauptsächlich durch antimikrobielle Hämoglobinfragmente, sogenannte Hämocidine, vorangetrieben [58]. Darüber hinaus umfassen die Abwehrmechanismen des Darms Moleküle wie antimikrobielle Peptide und möglicherweise reaktive Sauerstoffspezies [59].

Die Gattung Ehrlichia wurde in den Eingeweiden der CTRL-Gruppe gefunden, jedoch nicht in F, T oder T+F nachgewiesen. Im Jahr 2016 haben Cabezas-Cruz et al. [60] beschrieben eine neue Art, Ehrlichia minasensis, isoliert aus R. microplus-Hämolymphe, pathogen für Rinder. Bisher sind E. minasensis und E. ruminantium die einzigen Arten, von denen bekannt ist, dass sie Rinder auf natürliche Weise infizieren [61, 62]. Auch wenn die Identifizierung der Ehrlichia-Art oder mögliche Auswirkungen auf ihren Lebenszyklus in der vorliegenden Studie nicht behandelt wurden, stützt der Nichtnachweis dieser Gattung im Darm von mit Pilzen behandelten Zecken die Hypothese, dass eine entomopathogene Pilzinfektion das Auftreten negativ beeinflussen kann eines Bakteriums, das durch Zecken übertragene Krankheiten verursacht. Studien haben Auswirkungen von entomopathogenen Pilzen auf die Übertragung und den Lebenszyklus von vektorübertragenen Krankheitserregern nach Behandlung des Arthropoden mit dem Pilz (nämlich Glossina fuscipes fuscipes und Trypanosoma congolense) [63] sowie von Anopheles gambiae und Plasmodium falciparum [64] berichtet ]. Dennoch gibt es unseres Wissens nach keine Literatur zu Zecken-Erreger-Pilz-Wechselwirkungen, insbesondere im Vergleich zu Studien mit Insekten. Hier deutet die Störung der Zeckendarmmikrobiota durch den entomopathogenen Pilz Metarhizium (in Kombination mit oder nicht mit dem Antibiotikum) auf eine ausnutzbare Eigenschaft dieses Pilzes bei seinem Einsatz gegen Zecken hin. Allerdings konzentrierte sich die Analyse hier nur auf den Zeckendarm und nicht auf andere Zeckengewebe. Dementsprechend sind weitere Untersuchungen zu den dreigliedrigen Wechselwirkungen zwischen Zecken, Krankheitserregern und Pilzen erforderlich.

Die Herausforderung von R. microplus mit M. anisopliae verändert die Bakteriengemeinschaft im Zeckendarm hauptsächlich durch eine erhöhte Anreicherung des Endosymbionten Coxiella. Die Verabreichung von Tetracyclin plus M. anisopliae-Behandlung führt zu einer dramatischen Reduzierung der Coxiella-Population und verändert die Darmbakteriengemeinschaft von R. microplus durch Erhöhung der Bakterienvielfalt. Dennoch hat eine Antibiotikatherapie keinen Einfluss auf die Anfälligkeit der Zecken für den entomopathogenen Pilz.

Die gepaarten Sequenzen und die BioSamples-Zuordnung aus dieser Studie sind im NCBI-Repository unter dem Projektcode PRJNA849240 verfügbar.

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Wir freuen uns über die Unterstützung von Studenten des Laboratory of Microbial Control (LCM) und des Laboratory of Poultry Health (LASAVE) der UFRRJ, Brasilien.

Richard Alan Humber – im Ruhestand.

Diese Studie wurde teilweise von der Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – Brasilien (CAPES) – Finanzcode 001 finanziert und bietet MSc und Ph.D. Stipendien für LN Meirelles und TA Correa sowie den Nationalen Rat für wissenschaftliche und technologische Entwicklung (CNPq) Brasiliens zur Bereitstellung eines Doktortitels. Stipendium für E. Mesquita. Diese Forschung wurde durch ein Stipendium der Carlos Chagas Filho Foundation for Research of the State of Rio de Janeiro (FAPERJ) (Fördernummer E-26/201.389/2021) unterstützt. VREP Bittencourt, HA Santos und IS Coelho sind CNPq-Forscher.

Postgraduiertenprogramm in Veterinärwissenschaften, Veterinärinstitut, Federal Rural University of Rio de Janeiro, Seropédica, Brasilien

Emily Mesquita, Laura Nóbrega Meirelles, Thaís Almeida Corrêa, Vânia Rita Elias Pinheiro Bittencourt und Patrícia Silva Golo

Labor für Mikrobiologie und Enzymologie, Bundesuniversität Agreste Pernambuco, Garanhuns, PE, 55292-270, Brasilien

Diogo Paes da Costa

Abteilung für Tierparasitologie, Veterinärinstitut, Federal Rural University of Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, Brasilien

Mariana Guedes Camargo, Vânia Rita Elias Pinheiro Bittencourt und Patrícia Silva Golo

Abteilung für Veterinärmikrobiologie und Immunologie, Veterinärinstitut, Federal Rural University of Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, Brasilien

Irene da Silva Coelho

Abteilung für Epidemiologie und öffentliche Gesundheit, Veterinärinstitut, Federal Rural University of Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, Brasilien

Huarrison Azevedo Santos

USDA-ARS Emerging Pests and Pathogens Research, RW Holley Center for Agriculture and Health, Ithaca, NY, 14850, USA

Richard Alan Humber

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EM, HAS, ISC und PSG haben das Experiment konzipiert. EM, LNM, MGC und TAC führten die Experimente durch. DPC führte die statistische und bioinformatische Analyse der Daten und Grafiken durch. EM, ISC, HAS, DPS und PSG analysierten die Ergebnisse und verfassten das Manuskript. VREPB, MGC, PSG, ISC, HAS, DPS und RAH haben das Manuskript auf technische und wissenschaftliche Genauigkeit überprüft. PSG und VREPB akquirierten Fördermittel und betreuten das Projekt. Alle Autoren haben das endgültige Manuskript gelesen und genehmigt.

Korrespondenz mit Patrícia Silva Golo.

Unzutreffend.

Die Autoren geben an, dass kein Interessenkonflikt besteht.

Springer Nature bleibt neutral hinsichtlich der Zuständigkeitsansprüche in veröffentlichten Karten und institutionellen Zugehörigkeiten.

Relative Beteiligung der Bakterienklasse in jeder Composer-Nische im Netzwerk gemäß der multinomialen Artenklassifizierungsmethode (CLAM). Die Prozentwerte innerhalb der Kästchen wurden über eine ASV-Rohskala für jede Nische berechnet. Vergleiche der Behandlungen T (A), T+F (B) und B (C) mit der Kontrolle wurden aufgrund der größeren Kontraste hervorgehoben. Die auf der logarithmischen (ASV+1)-Transformation basierenden Prozentsätze sind auf der vertikalen Achse in Klammern angegeben. Behandlungen: ctrl – mit Pilzen unbehandelte Zecken, die zuvor mit reinem Blut gefüttert wurden (Kontrollgruppe); F – mit Pilzen behandelte Zecken, die zuvor mit reinem Blut gefüttert wurden; T+F – mit Pilzen behandelte Zecken, die zuvor mit Blut plus Tetracyclin gefüttert wurden; B – reine Blutprobe vom Kalb.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Mesquita, E., da Costa, DP, Meirelles, LN et al. Die Behandlung mit entomopathogenen Pilzen verändert die Darmbakterienvielfalt von Rhipicephalus microplus-Zecken. Parasites Vectors 16, 185 (2023). https://doi.org/10.1186/s13071-023-05790-5

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Eingegangen: 15. Februar 2023

Angenommen: 27. April 2023

Veröffentlicht: 06. Juni 2023

DOI: https://doi.org/10.1186/s13071-023-05790-5

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